目的:探討熱休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(chip)在高糖(hg)介導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞損傷中的作用.方法:培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞(huvecs),利用rna干擾技術(shù)下調(diào)chip表達,再以5.5 mmol/l正常濃度葡萄糖(ng)或25.5 mmol/l高濃度葡萄糖(hg)處理24 h,實驗前用甘露醇排除滲透壓對實驗的干擾,接著將細胞分成ng+sirna nc組,ng+sirna chip組,hg+sirna nc組和hg+sirna chip組.mtt法和tunel染色法分別檢測細胞活力和凋亡率;elisa試劑盒檢測內(nèi)皮素1(et-1)的表達水平;二氫乙啶熒光染料法檢測細胞內(nèi)活性氧簇(ros)水平;一氧化氮(no),超氧化物岐化酶(sod)及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inos)試劑盒分別檢測細胞內(nèi)no水平及sod,inos活性;rt-qpcr檢測白細胞介素8(il-8)和單核細胞趨化蛋白1(mcp-1)的mrna表達量;western blot檢測chip,nadph氧化酶(nox)2,nox4,p38,p65,p-p38,p-p65,bax和bcl-2蛋白表達水平.結(jié)果:與ng+sir
更新時間:2025-06-26