LLC-RFP-Puro穩(wěn)轉(zhuǎn)株RFP 是紅色熒光蛋白（Red Fluorescent Protein）的縮寫，Puro 指嘌呤霉素（Puromycin），是一種抗生素抗性基因。該穩(wěn)轉(zhuǎn)株是通過將表達 RFP 的基因和 Puro 抗性基因?qū)��?LLC 細胞中，并經(jīng)過篩選得到的能夠穩(wěn)定表達 RFP 且對嘌呤霉素具有抗性的細胞株。

LLC-RFP-Puro穩(wěn)轉(zhuǎn)株

英文名稱	LLC-RFP-Puro polyclonal stable cell line
產(chǎn)品貨號	XY-M1101
中文名稱	RFP 標記的 LLC 穩(wěn)轉(zhuǎn)株
Lot number	LLC-10A2P
細胞規(guī)格	復蘇細胞 (T25細胞瓶) 或1 × 106 細胞凍存細胞
細胞形態(tài)	上皮細胞樣
生長特性	貼壁生長
細胞株 構建流程	（1）構建目的基因過表達慢病毒重組質(zhì)粒，并包裝慢病毒； （2）慢病毒以合適的MOI值轉(zhuǎn)導靶細胞； （3）用最佳濃度藥物對細胞株進行篩選，獲得混合穩(wěn)轉(zhuǎn)株； （4）穩(wěn)轉(zhuǎn)株質(zhì)檢（COA）。
完全培養(yǎng)基	DMEM-H + 10% FBS+ 1% P/S（選擇添加）
培養(yǎng)條件	(1) 氣相：95%空氣，5% CO2；(2) 溫度：37 ℃。
細胞凍存	無血清凍存液
存儲條件	液氮

背景與來源

LLC 通常指小鼠 LLC 肺癌細胞（Lewis Lung Carcinoma cells）。RFP 是紅色熒光蛋白（Red Fluorescent Protein）的縮寫，Puro 指嘌呤霉素（Puromycin），是一種抗生素抗性基因。該穩(wěn)轉(zhuǎn)株是通過將表達 RFP 的基因和 Puro 抗性基因?qū)��?LLC 細胞中，并經(jīng)過篩選得到的能夠穩(wěn)定表達 RFP 且對嘌呤霉素具有抗性的細胞株。

構建過程

一般是利用基因工程技術，將含有 RFP 基因和 Puro 抗性基因的表達載體通過轉(zhuǎn)染或感染等方法導入 LLC 細胞。然后，在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中進行篩選，只有那些成功導入并穩(wěn)定表達 Puro 抗性基因的細胞才能存活下來，同時這些細胞也會穩(wěn)定表達 RFP。

應用

細胞示蹤：由于 RFP 能夠發(fā)出紅色熒光，可在體外或體內(nèi)對 LLC-RFP-Puro 細胞進行追蹤，觀察其在不同環(huán)境下的生長、遷移和分化等行為。例如，在腫瘤研究中，將該細胞接種到動物模型中，可以通過熒光成像技術實時監(jiān)測腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移情況。

藥物篩選：Puro 抗性基因的存在使得可以利用嘌呤霉素來篩選和維持穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株。同時，也可以利用該細胞株來篩選針對 LLC 細胞的抗癌藥物，觀察藥物對細胞生長、凋亡等方面的影響。

基因功能研究：可以將感興趣的基因與 RFP 基因構建成融合蛋白表達載體，再導入 LLC-RFP-Puro 細胞中，通過觀察 RFP 的熒光變化來研究目的基因的表達和定位等情況，進而探討基因的功能。

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