HuH-6-GFP-Puro穩(wěn)轉株

背景：HuH-6 細胞為人肝母細胞。穩(wěn)轉株是指在某一細胞株中過表達或抑制某一特定基因的細胞系。HuH-6-GFP -Puro 穩(wěn)轉株就是在 HuH-6 細胞的基礎上，通過一定的技術手段，使細胞能夠穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白（GFP），并且含有嘌呤霉素（Puro）抗性基因。

構建原理：通常是將包含 GFP 基因和 Puro 抗性基因的表達框構建到重組載體上，然后借助慢病毒系統(tǒng)或轉座子系統(tǒng)等將目的基因的表達框導入 HuH -6 細胞，并整合到細胞的染色體上。這樣，當細胞分裂時，目的基因就會隨著染色體的復制而傳遞給子代細胞，從而實現(xiàn) GFP 的穩(wěn)定表達。同時，Puro 抗性基因的存在使得在細胞培養(yǎng)過程中，可以使用嘌呤霉素進行篩選，只有成功整合了目的基因的細胞才能在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中存活并繼續(xù)生長，從而得到穩(wěn)定表達 GFP 的 HuH -6 細胞株，即 HuH -6 - GFP - Puro 穩(wěn)轉株。

應用：

熒光示蹤：由于細胞穩(wěn)定表達 GFP，在熒光顯微鏡下可以發(fā)出綠色熒光，因此可以方便地對細胞進行標記和追蹤。例如，在研究細胞的遷移、分化、體內分布等過程中，通過觀察 GFP 的熒光信號，能夠直觀地了解 HuH -6 細胞的行為變化。

藥物篩選和基因功能研究：利用 Puro 抗性進行藥物篩選，能夠快速篩選出穩(wěn)定表達目的基因的細胞。同時，通過對穩(wěn)轉株進行各種實驗處理，對比正常 HuH -6 細胞，可以研究 GFP 基因或其他相關基因對細胞生長、增殖、凋亡、代謝等生物學功能的影響，也可用于研究與肝母細胞相關的疾病機制、藥物作用靶點等。

作為實驗模型：為相關疾病的研究、藥物研發(fā)等提供了一個穩(wěn)定的細胞模型。例如，在開發(fā)針對肝母細胞瘤的治療藥物時，可以利用該穩(wěn)轉株來評估藥物對腫瘤細胞的作用效果、毒性等。

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