A-431-GFP-Puro穩(wěn)轉(zhuǎn)株

A-431-GFP-Puro 穩(wěn)轉(zhuǎn)株概述

A-431 細(xì)胞是一種源自人表皮樣癌細(xì)胞的細(xì)胞系，具有貼壁生長特性，常用于細(xì)胞生物學(xué)、腫瘤研究及藥物篩選等領(lǐng)域。**GFP（綠色熒光蛋白）** 作為報告基因，可通過熒光顯微鏡直接觀察細(xì)胞形態(tài)、定位及表達(dá)情況。Puro（嘌呤霉素）則是一種抗生素，用于穩(wěn)轉(zhuǎn)株的篩選 —— 通過構(gòu)建含有 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，利用嘌呤霉素篩選出成功整合外源基因的細(xì)胞克隆，從而獲得穩(wěn)定表達(dá) GFP 的 A-431 穩(wěn)轉(zhuǎn)株（A-431-GFP-Puro）。

主要應(yīng)用場景

細(xì)胞示蹤與成像研究

利用 GFP 熒光特性，實時追蹤細(xì)胞在體內(nèi)外的遷移、增殖或分化過程（如腫瘤細(xì)胞侵襲模型）。

結(jié)合熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)，分析細(xì)胞周期、凋亡或藥物處理后的形態(tài)變化。

基因表達(dá)與功能研究

作為載體工具，用于過表達(dá)或敲低特定基因（需與其他質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染），通過 GFP 熒光強(qiáng)度評估轉(zhuǎn)染效率或基因表達(dá)水平。

研究蛋白亞細(xì)胞定位（如 GFP 融合蛋白在細(xì)胞膜、細(xì)胞核或細(xì)胞器中的分布）。

藥物篩選與毒性評估

在高通量篩選中，通過熒光信號強(qiáng)度快速判斷藥物對細(xì)胞活性的影響（如細(xì)胞增殖抑制或凋亡誘導(dǎo)）。

利用穩(wěn)轉(zhuǎn)株的均一性，減少實驗誤差，提高藥物評價的可靠性。

腫瘤研究與動物模型

構(gòu)建荷瘤小鼠模型時，GFP 標(biāo)記可直觀觀察腫瘤生長、轉(zhuǎn)移及治療響應(yīng)（如熒光成像監(jiān)測腫瘤體積變化）。

構(gòu)建流程（簡要）

載體構(gòu)建：將 GFP 基因與嘌呤霉素抗性基因（PuroR）插入到合適的質(zhì)粒載體（如 pLVX 系列慢病毒載體）中，形成重組質(zhì)粒。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、電穿孔或病毒感染（如慢病毒）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入 A-431 細(xì)胞。

篩選與克隆化：使用嘌呤霉素（濃度需預(yù)實驗優(yōu)化，通常為 0.5–2 μg/mL）處理細(xì)胞，未成功整合質(zhì)粒的細(xì)胞死亡，存活細(xì)胞通過有限稀釋法或單細(xì)胞分選獲得單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

鑒定與擴(kuò)增：通過熒光顯微鏡觀察 GFP 表達(dá)效率，經(jīng) Western blot 或流式細(xì)胞術(shù)驗證蛋白水平，擴(kuò)大培養(yǎng)后凍存?zhèn)溆谩?/span>

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