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HS68-RFP-Puro穩(wěn)轉(zhuǎn)株
英文名稱(chēng) | HS68-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
產(chǎn)品貨號(hào) | XY-H1818 |
中文名稱(chēng) | RFP 標(biāo)記的 HS68 穩(wěn)轉(zhuǎn)株 |
Lot number | HS68-10A2P |
細(xì)胞規(guī)格 | 復(fù)蘇細(xì)胞 (T25細(xì)胞瓶) 或1 × 106 細(xì)胞凍存細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
細(xì)胞株 構(gòu)建流程 | （1）構(gòu)建目的基因過(guò)表達(dá)慢病毒重組質(zhì)粒，并包裝慢病毒； （2）慢病毒以合適的MOI值轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞； （3）用最佳濃度藥物對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行篩選，獲得混合穩(wěn)轉(zhuǎn)株； （4）穩(wěn)轉(zhuǎn)株質(zhì)檢（COA）。 |
完全培養(yǎng)基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（選擇添加） |
培養(yǎng)條件 | (1) 氣相：95%空氣，5% CO2；(2) 溫度：37 ℃。 |
細(xì)胞凍存 | 無(wú)血清凍存液 |
存儲(chǔ)條件 | 液氮 |
HS68 細(xì)胞系：HS68 細(xì)胞是來(lái)源于人類(lèi)新生兒包皮的成纖維細(xì)胞系。它屬于有限細(xì)胞系，在體外培養(yǎng)條件下經(jīng)過(guò)一定的傳代次數(shù)后會(huì)出現(xiàn)衰老現(xiàn)象，如在 ATCC（美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心）保藏的 HS68 細(xì)胞（ATCC 編號(hào)為 CRL - 1635）一般在 42 代左右會(huì)出現(xiàn)衰老。
RFP 標(biāo)記：RFP 是一種紅色熒光蛋白，可作為報(bào)告基因用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)的各種生物學(xué)過(guò)程。在 HS68 - RFP - Puro 穩(wěn)轉(zhuǎn)株中，RFP 基因被導(dǎo)入到 HS68 細(xì)胞的基因組中，并穩(wěn)定表達(dá)。通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)等方法，可以觀察到細(xì)胞發(fā)出紅色熒光，從而方便對(duì)細(xì)胞進(jìn)行追蹤、定位以及定量分析等。例如，在研究細(xì)胞的遷移、分化以及細(xì)胞間相互作用等實(shí)驗(yàn)中，RFP 標(biāo)記可以幫助研究者清晰地觀察到 HS68 細(xì)胞的行為變化。
嘌呤霉素抗性：Puro 是一種抗生素，能夠抑制細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，從而殺死不具有 Puro 抗性的細(xì)胞。在構(gòu)建 HS68 - RFP - Puro 穩(wěn)轉(zhuǎn)株的過(guò)程中，攜帶 RFP 基因的載體同時(shí)也攜帶了 Puro 抗性基因。當(dāng)用含有 Puro 的培養(yǎng)基對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行篩選時(shí)，只有那些成功整合了外源載體并穩(wěn)定表達(dá) Puro 抗性蛋白的細(xì)胞才能存活下來(lái)，這些細(xì)胞就是我們所需要的 HS68 - RFP - Puro 穩(wěn)轉(zhuǎn)株。這種篩選方法可以有效地去除未成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，保證得到的細(xì)胞株能夠穩(wěn)定表達(dá) RFP。
構(gòu)建 HS68 - RFP - Puro 穩(wěn)轉(zhuǎn)株通常包括以下步驟：首先，選擇合適的表達(dá)載體，將 RFP 基因克隆到帶有 Puro 抗性基因的載體上；然后，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、電穿孔法或病毒轉(zhuǎn)染等方法將重組載體導(dǎo)入 HS68 細(xì)胞；接著，用含有 Puro 的培養(yǎng)基對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，殺死未成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞；，通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)等方法對(duì)篩選得到的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，挑選出穩(wěn)定表達(dá) RFP 的細(xì)胞株，即 HS68 - RFP - Puro 穩(wěn)轉(zhuǎn)株。
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