ECV-304-Puro+ffluc穩(wěn)轉(zhuǎn)株
英文名稱 | ECV-304-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
產(chǎn)品貨號(hào) | XY-H2414 |
中文名稱 | ffluc 標(biāo)記的 ECV-304 穩(wěn)轉(zhuǎn)株 |
Lot number | ECV-304-24D3P |
細(xì)胞規(guī)格 | 復(fù)蘇細(xì)胞 (T25細(xì)胞瓶) 或1 × 106 細(xì)胞凍存細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
細(xì)胞株 構(gòu)建流程 | (1)構(gòu)建目的基因過表達(dá)慢病毒重組質(zhì)粒,并包裝慢病毒; (2)慢病毒以合適的MOI值轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞; (3)用最佳濃度藥物對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行篩選,獲得混合穩(wěn)轉(zhuǎn)株; (4)穩(wěn)轉(zhuǎn)株質(zhì)檢(COA)。 |
完全培養(yǎng)基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S(選擇添加) |
培養(yǎng)條件 | (1) 氣相:95%空氣,5% CO2;(2) 溫度:37 ℃。 |
細(xì)胞凍存 | 無(wú)血清凍存液 |
存儲(chǔ)條件 | 液氮 |

ECV-304 細(xì)胞:ECV-304 細(xì)胞是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株,經(jīng)測(cè)試不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌,具有良好的增殖和分化潛能,可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等,流式檢測(cè)結(jié)果顯示 CD29、CD44、CD105 陽(yáng)性,CD34、CD45 陰性。
穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建:通常是將含有目的基因(如 ffluc 基因)以及篩選標(biāo)記基因(如 Puro 抗性基因)的載體,通過慢病毒感染或轉(zhuǎn)染等方法導(dǎo)入 ECV-304 細(xì)胞,使目的基因整合到細(xì)胞的染色體上。然后利用嘌呤霉素(Puro)進(jìn)行篩選,只有成功整合了外源基因并表達(dá) Puro 抗性蛋白的細(xì)胞才能在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中存活,從而得到穩(wěn)定表達(dá)目的基因的 ECV-304-Puro+ffluc 穩(wěn)轉(zhuǎn)株。
Puro 抗性基因的作用:Puro 抗性基因作為篩選標(biāo)記,使細(xì)胞獲得對(duì)嘌呤霉素的抗性。在篩選過程中,未成功導(dǎo)入外源基因的細(xì)胞會(huì)因嘌呤霉素的作用而死亡,只有整合了含 Puro 抗性基因載體的細(xì)胞才能存活并繼續(xù)增殖,保證了篩選出的細(xì)胞是穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞株。
ffluc 基因的作用:ffluc 基因通常是指螢火蟲熒光素酶基因,其表達(dá)的熒光素酶可以催化熒光素底物發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生生物發(fā)光。在實(shí)驗(yàn)中,可通過檢測(cè)熒光信號(hào)來(lái)反映 ffluc 基因的表達(dá)情況,進(jìn)而了解目的基因在細(xì)胞中的表達(dá)水平、定位以及細(xì)胞的生理狀態(tài)等,常用于藥物研發(fā)、基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等研究領(lǐng)域。例如,在藥物篩選實(shí)驗(yàn)中,可以通過觀察熒光信號(hào)的變化來(lái)判斷藥物對(duì)細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)或信號(hào)通路的影響。
ECV-304-Puro+ffluc 穩(wěn)轉(zhuǎn)株在科研中具有重要作用,為相關(guān)研究提供了穩(wěn)定的細(xì)胞模型,有助于深入探究基因功能、細(xì)胞信號(hào)通路以及藥物作用機(jī)制等方面的問題。
僅用于科研,不能用于臨床診斷!所有產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于人或動(dòng)物的治療等任何其他用途,不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù)。
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