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HCT116-Puro+BRAF [h,V600E]穩(wěn)轉(zhuǎn)株
產(chǎn)品名稱(chēng) | HCT116-Puro+BRAF [h,V600E] 穩(wěn)轉(zhuǎn)株 |
產(chǎn)品貨號(hào) | XY-H2746 |
中文名稱(chēng) | 過(guò)表達(dá) V600E 突變 BRAF 的 HCT116 穩(wěn)轉(zhuǎn)株 |
Lot number | HCT116-33D6P |
細(xì)胞規(guī)格 | 復(fù)蘇細(xì)胞 (T25細(xì)胞瓶) 或1 × 106 細(xì)胞凍存細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
細(xì)胞株 構(gòu)建流程 | （1）構(gòu)建目的基因過(guò)表達(dá)慢病毒重組質(zhì)粒，并包裝慢病毒； （2）慢病毒以合適的MOI值轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞； （3）用最佳濃度藥物對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行篩選，獲得混合穩(wěn)轉(zhuǎn)株； （4）穩(wěn)轉(zhuǎn)株質(zhì)檢（COA）。 |
完全培養(yǎng)基 | DMEM-H + 10％ FBS |
培養(yǎng)條件 | (1) 氣相：95%空氣，5% CO2；(2) 溫度：37 ℃。 |
細(xì)胞凍存 | 無(wú)血清凍存液 |
存儲(chǔ)條件 | 液氮 |
細(xì)胞株背景
HCT116 細(xì)胞：HCT116 是一種人結(jié)腸癌細(xì)胞系，在癌癥研究中被廣泛應(yīng)用。它具有結(jié)腸癌細(xì)胞的典型特征和生物學(xué)行為，可用于研究結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制、藥物篩選等多個(gè)方面。
BRAF 基因及突變
BRAF 基因：BRAF 基因是一種原癌基因，其編碼的 BRAF 蛋白是絲氨酸 / 蘇氨酸蛋白激酶，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路中發(fā)揮重要作用，特別是在 RAS-RAF-MEK-ERK 信號(hào)通路中，參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過(guò)程。
V600E 突變：是 BRAF 基因的一種常見(jiàn)突變類(lèi)型，發(fā)生在第 600 位氨基酸（纈氨酸 Val 變?yōu)楣劝彼?Glu）。該突變會(huì)使 BRAF 蛋白持續(xù)激活，進(jìn)而導(dǎo)致下游信號(hào)通路過(guò)度活化，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和存活，在多種癌癥的發(fā)生發(fā)展中起到關(guān)鍵作用，如結(jié)腸癌、黑色素瘤等。在結(jié)腸癌中，BRAF V600E 突變約占 15% 左右。
穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建
Puro 的作用：Puro 通常指嘌呤霉素（Puromycin），在穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建過(guò)程中，它常作為一種篩選標(biāo)記。當(dāng)細(xì)胞被轉(zhuǎn)染了含有嘌呤霉素抗性基因的載體后，只有成功轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達(dá)該抗性基因的細(xì)胞才能在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中存活，從而篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株。
構(gòu)建過(guò)程：一般是通過(guò)將攜帶 BRAF [h,V600E] 突變基因的表達(dá)載體（可能還包含嘌呤霉素抗性基因等元件），以某種轉(zhuǎn)染方法（如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染等）導(dǎo)入 HCT116 細(xì)胞中。然后在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的培養(yǎng)和篩選，未成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞死亡，而成功轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達(dá) BRAF [h,V600E] 基因的細(xì)胞則存活下來(lái)，形成 HCT116-Puro+BRAF [h,V600E] 穩(wěn)轉(zhuǎn)株。
應(yīng)用
癌癥研究：該穩(wěn)轉(zhuǎn)株可用于深入研究 BRAF V600E 突變?cè)诮Y(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，例如研究其對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響，以及對(duì)相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控作用。
藥物研發(fā)：作為模型細(xì)胞株用于篩選針對(duì) BRAF V600E 突變的抗癌藥物，評(píng)估藥物對(duì)該突變細(xì)胞的抑制效果、作用靶點(diǎn)和機(jī)制等。也可用于研究藥物耐藥性的發(fā)生機(jī)制，以及開(kāi)發(fā)克服耐藥的策略。
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