產(chǎn)品相冊

二、使用方法

客戶收到CCD-1095Sk細(xì)胞株后，請按照以下方法進(jìn)行操作。

1.         收到細(xì)胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快和我們聯(lián)系。

2.         如包裝完好，取出25cm²培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，細(xì)胞的貼壁情況以及細(xì)胞密度,然后放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3.         細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，棄除培養(yǎng)瓶中大部分液體，只剩5-10ml左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了，超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。

4.         細(xì)胞傳代

1)        吸出25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS 2-3ml清洗細(xì)胞一次；

2)        添加0.25%胰蛋白酶消化液約1.5ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；

3)        用吸管輕輕吹打混勻，按1:2等適當(dāng)?shù)谋壤�進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5ml，放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4)        待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

三、注意事項

1.         在CCD-1095Sk細(xì)胞株培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作；

2.         傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)；

3.         CCD-1095Sk細(xì)胞株只可用于科研。

四、冷凍保存細(xì)胞之方法

     冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃(30－60 分鐘)→-20℃( 30 分鐘) → -80℃(16－18 小時或隔夜)→ 液氮罐長期儲存。

     冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80 ℃以下， 再放入液氮中長期儲存。注意：-20℃不可超過1 小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

五、細(xì)胞復(fù)蘇

    取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1－2 分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細(xì)胞，用75％消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。

   剛收到細(xì)胞時，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài)，細(xì)胞穩(wěn)定后

再調(diào)回10%即可。www.elisakits.cn

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